摘要：本應用簡報介紹了采用 Agilent 6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)檢測替丁類藥物中的 N-亞 硝基er甲胺 (NDMA) 的方法。該方法可以有效避免替丁類藥物受熱不穩(wěn)定而分解出亞硝胺 的問題，檢測結(jié)果準確、重現(xiàn)性好、特異性強，且靈敏度優(yōu)于 NDMA 目前的法規(guī)*要 求（96 ng/天）。該方法適用于對鹽酸雷尼替丁、枸櫞酸雷尼替丁、尼扎替丁、西咪替丁 和法莫替丁等替丁類藥物和制劑中的 NDMA 進行快速、準確的定量分析。

前言： 2019 年 9 月，F(xiàn)DA 爆出胃藥雷尼替丁中含有超過*的亞硝胺類致癌物 N-亞硝基er甲胺 (NDMA)，隨后出現(xiàn)大量涉及多個品牌的雷尼替丁藥品召回事件[1]。這是繼沙坦類藥 物后，第二種被爆出含有超*亞硝胺類雜質(zhì)的藥物，并使得監(jiān)管機構對其它可能遭受污 染的化學合成藥物越來越警惕。

N-亞硝基er甲胺 (NDMA)，又稱二甲基亞硝胺 (CAS 64-75-9)， 結(jié)構如圖 1 所示，具有很強的肝臟毒性，屬于亞硝胺類遺傳毒性 雜質(zhì)。根據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構公布的致癌物清單， NDMA 屬于 2A 類致癌物，即“對人很可能致癌，此類致癌物對 人致癌性證據(jù)有限，對實驗動物致癌性證據(jù)充分”[2]。根據(jù) FDA 之前的評估結(jié)果，將 NDMA 可接受*規(guī)定為 96 ng/天[3]。而 雷尼替丁 (Ranitidine) 的結(jié)構中含有亞硝胺類似基團（見圖 1）， 根據(jù) FDA 的研究[1]，其受熱后會分解出 NDMA。因此，不適合采 用 GC-MS 檢測雷尼替丁，而需要利用更溫和的 LC-MS 技術。同 樣，從結(jié)構角度來看，在其他替丁類藥物的分析中也要考慮熱不 穩(wěn)定問題。 關于雷尼替丁中 NDMA 的檢測，F(xiàn)DA 在 2019 年 9 月公布了 LC-HRMS 和 LC-MS/MS 方法[1]；歐洲 OMCL 實驗室推薦采用 LC-MS/MS 方法[4]；同期，我國藥品監(jiān)管部門也發(fā)布了雷尼替丁 的推薦 LC-MS/MS 檢測方法，并于同年 10 月，將方法擴展到 其他替丁類藥物（枸櫞酸雷尼替丁和尼扎替丁等）。值得一提的 是，在三大機構的推薦方法中，都用到安捷倫三重四極桿液 質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)。 本研究依據(jù)中國食品藥品檢定研究院替丁類藥物中 NDMA 推薦檢 測方法的要求，采用定量的金標準三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)進行 測試。該方法有效避免了替丁類藥物受熱不穩(wěn)定而分解出亞硝胺 的問題，靈敏度高、特異性強且重現(xiàn)性好，適用于定量分析鹽酸 雷尼替丁、枸櫞酸雷尼替丁、尼扎替丁、西咪替丁和法莫替丁等 替丁類藥物中的 NDMA。

實驗部分：試劑和樣品 甲醇為質(zhì)譜級，甲酸為色譜級，購自 Merck；所用實驗用水為利 用 Millipore Milli-Q 超純水系統(tǒng)現(xiàn)制備的高純?nèi)ルx子水；NDMA 標 準品溶液及樣品由合作用戶提供。 儀器和設備 采用 Agilent 1290 Infinity II 超高效液相色譜系統(tǒng)與 6470 三重四極 桿質(zhì)譜聯(lián)用，其中色譜系統(tǒng)配備二元泵（部件號 G7120A）、自動 進樣器（部件號 G7167B）和柱溫箱（部件號 G7116B），質(zhì)譜系 統(tǒng)配備大氣壓化學電離 (APCI) 離子源。為確保替丁類藥物與 NDMA 有效分離，色譜柱選用 Agilent EclipsePlus C18 RRHD（3.0 × 150 mm, 1.8 µm，部件號 959759- 302）。

標樣配制 取 NDMA 標準品溶液（1000 mg/L 甲醇溶液），用適當溶劑（與 樣品前處理采用相同的溶劑）逐級稀釋成每 1 mL 中分別含 1、 2、5、10、50、100、500 ng 標準品的溶液，作為校準標樣。并 將 1 ng/mL 溶液稀釋三倍，作為靈敏度測試溶液。 樣品前處理 對于原料藥，建議稱取日最大攝入量。加 10 mL 水或甲醇（取決 于藥物溶解度），振搖使其溶解后，離心，取上清液檢測。 制劑和片劑經(jīng)預先研磨后稱重，膠囊則取內(nèi)容物稱重，建議稱 取日最大攝入量。加 10 mL 水或甲醇（取決于藥物溶解度），搖 勻，渦旋混合 1 min，再振搖 40 min，離心后取上清液進行檢 測。由于替丁類藥物熱穩(wěn)定性差，因此應避免使用可能產(chǎn)熱的劇 烈操作（如超聲等）。 液相色譜條件 色譜柱： EclipsePlus C18 RRHD, 3.0 × 150 mm, 1.8 μm 流速： 0.4 mL/min 柱溫： 40 °C 流動相： A) 0.1% 甲酸水溶液 B) 甲醇 梯度程序： 時間 (min) B (%) 0.00 5.00 3.50 5.00 4.50 20.00 4.60 100.00 10.00 100.00 10.10 5.00 11.00 5.00 后運行時間： 2 min

質(zhì)譜條件 離子源： APCI 離子源 霧化氣、干燥氣及碰撞氣： 氮氣 霧化氣壓力： 35.0 psi 干燥氣溫度： 300 °C 干燥氣流速： 5 L/min 蒸發(fā)室溫度： 350 °C VCap 電壓： 1500 V 電暈針電流： 6 μA 檢測模式： 多反應監(jiān)測 (MRM) MRM 參數(shù)： 如表 1 所列

結(jié)果與討論：色譜分離結(jié)果 本研究選擇適合的反相色譜柱，結(jié)合梯度洗脫，利用 NDMA 的弱 保留性，使其與高濃度替丁類藥物分離。同時利用藥典推薦的紫 外吸收信號監(jiān)測高濃度藥物的洗脫情況，結(jié)果如圖 2 所示，所有 替丁類藥物均在 NDMA 后洗脫，不會干擾 NDMA 的測定。本實 驗條件下，NDMA 的保留時間約為 3.5 min，與各類替丁藥物分 離良好。 為避免污染質(zhì)譜系統(tǒng)，在 NDMA 出峰前后，推薦流路設置“引入 廢液”。另外，建議高比例有機相沖洗較長時間，保證高濃度 API 及輔料等物質(zhì)*洗脫。