導(dǎo) 讀

*等抗凝血類鼠藥由于其毒鼠效力強、滅鼠效果好，被廣泛用來滅鼠。近些年來，涉及該類鼠藥中毒事（案）件屢有發(fā)生，給社會穩(wěn)定和人民生命安全造成嚴重威脅。早期如2005年重慶某地村民帶鼠藥混入壽宴投毒，致31人中毒5人死亡；近期如2022年上半年，青海某地村民稱家中多人出現(xiàn)尿血情況，經(jīng)到醫(yī)院檢查是*中毒，后被警方破獲實為一起鼠藥投毒案。

近期，浙江省公安司法鑒定中心采用在線超臨界流體技術(shù)Online SFE-SFC-MS 系統(tǒng)建立了血液中8種鼠藥的在線超臨界流體提取檢測方法，簡化了血液樣品的前處理過程，具有使用溶劑少、需要樣品量少、綠色環(huán)保的特點，并實現(xiàn)了樣品提取檢測的全程自動化，相關(guān)成果發(fā)表在《中國法醫(yī)學(xué)雜志》期刊上。

直擊痛點：前處理方法創(chuàng)新

傳統(tǒng)上，對血液中這類鼠藥的檢測一般采用蛋白沉淀法處理血樣后，以LC-MS作為檢測手段進行檢測，該方法前處理及分析過程需要大量用到甲醇、乙腈等有機溶劑，且手動前處理容易帶來人為誤差，耗時耗力。

超臨界流體色譜(SFC)是以超臨界流體和少量改性劑為流動相的新型色譜分離技術(shù)。超臨界流體具有低黏度、高擴散性和高溶解性等特點，使得SFC分析具有快速、高效、高分離等優(yōu)勢。將超臨界流體作為萃取溶劑進行超臨界流體萃取(SFE), 可以大大縮短萃取時間，并且與常規(guī)使用的溶劑萃取法相比，具有使用溶劑少、需要樣品量少、綠色環(huán)保的特點。

圖1. 島津Nexera UC在線SFE-SFC-MS系統(tǒng)

實驗流程：方法學(xué)驗證可靠

將100 μL血液樣品與5 g無水硫酸鈉混勻，裝入5 mL萃取罐中壓緊，按照設(shè)定條件進行在線SFE萃取，萃取過程分為靜態(tài)萃取和動態(tài)萃取，萃取物被自動引入色譜柱柱頭進行捕集，而后按照設(shè)定的SFC-MS條件進行分析。樣品處理簡單快捷，萃取和分離分析過程均自動在線完成。

圖2. SFE萃取過程

u 色譜圖

*等8種抗凝血類鼠藥的MRM色譜圖如圖3所示，目標組分峰形良好，且*、氟鼠靈、鼠得克等手性化合物的異構(gòu)體可以實現(xiàn)基線分離，可見，SFC較適宜用于手性物質(zhì)分離，目前已有相關(guān)研究報道SFC正成為拆分對映異構(gòu)體的首選。

圖3. 8種鼠藥的SFC-MS圖

u 萃取效率

為考察SFE對各組分的萃取效率，通過重復(fù)對同一萃取罐內(nèi)樣品連續(xù)四次在線SFE-SFC-MS聯(lián)用分析，以每次萃取所得的鼠藥峰面積與四次萃取峰面積和的比值表示歸一化萃取率。結(jié)果表明：前兩次萃取的效率較高，各組分前兩次的萃取率之和在73.02%~93.62%之間，基本可以滿足實驗要求。因此，后續(xù)實驗時，SFE的萃取次數(shù)固定為兩次。

表2. SFE的歸一化萃取效率

方法優(yōu)勢明顯，應(yīng)用前景廣闊

l Online SFE-SFC-MS 系統(tǒng)簡化了血液樣品的前處理過程，實現(xiàn)了樣品提取檢測的全程自動化，減輕了人力成本。

l SFE主要以超臨界二氧化碳作為萃取劑，在處理生物樣品時，無機鹽等較少被提取，相比蛋白沉淀法處理的樣品，對儀器的污染更少，產(chǎn)生的背景噪音更低。

l SFC-MS 采用超臨界二氧化碳作為流動相，與需要使用甲醇、乙腈等有機溶劑作為流動相的LC-MS檢測體系相比，其對環(huán)境更為友好且對手性物質(zhì)存在分離優(yōu)勢。

結(jié)論

采用在線超臨界流體技術(shù)Online SFE-SFC-MS 系統(tǒng)建立了血液中8種鼠藥的在線超臨界流體提取檢測方法，簡化了樣品的前處理過程，實現(xiàn)了樣品提取檢測的全程自動化，且對環(huán)境更加友好。破解鼠藥命案，在線超臨界流體技術(shù)助力科技強偵，還原事實真相。

撰稿人：陳建立

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