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UHPLC-CMS 法分析非離子型造影劑碘己醇
碘己醇是一種廣泛使用的非離子型造影劑，用于提高 X 射線分析的對比度，低滲透的特性可以使其通過腎臟快速清除，防止再吸收和進一步代謝，這使得碘己醇比其他造影劑使用更安全。在許多臨床成像應(yīng)用中，造影劑可以提高掃描的對比度和空間分辨率，但由于造影劑的毒性和副作用，其已知濃度的制劑及其純度分析對于它們的安全使用和準(zhǔn)確診斷非常重要。本文介紹了一種簡便、準(zhǔn)確的 HPLC-CMS 分析碘己醇的方法。
實驗方法
實驗試劑
應(yīng)用中使用的所有溶劑均為 HPLC 級。兩個碘己醇標(biāo)準(zhǔn)品：一個是純度為 99.99% 的認(rèn)證參考物質(zhì)，第二個純度≥95%。
實驗儀器
所有實驗均在 AIS expression® CMS 上進行，與 AVANT™ UHPLC 系統(tǒng)聯(lián)用，參數(shù)如表 1 所示。
HPLC/UV/MS 分析碘己醇（100微克/毫升）
在室溫下，碘己醇會發(fā)生異構(gòu)化，在 HPLC/UV/MS 分析中可以檢測到兩個峰。
這兩個峰 ( 圖1A ) 是由于在碘己醇的中心苯環(huán)上附著了大量的碘原子，從而阻礙了苯環(huán)上酰氨基的N-乙酰基團的旋轉(zhuǎn)。這兩種化合物本質(zhì)上是“旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體”，在室溫下在水溶液中緩慢互換。
圖1：(A) 碘己醇的 HPLC 圖（254nm），(B) 質(zhì)子化碘己醇的提取離子圖（m/z 821.8），(C) 在保留時間 4.06 分鐘處峰值的平均質(zhì)譜圖。
兩個峰通過質(zhì)譜（MS）分析確認(rèn)，顯示出相同的質(zhì)荷比（m/z）為821.9（見圖 1B 和 1C），并且在它們的源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離（CID）質(zhì)譜圖中沒有可見差異（見圖 2A 和 2B）。在x射線分析中，兩個旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體都發(fā)揮作用。
圖2：(A) 在保留時間 3.61 分鐘處峰值的平均源內(nèi) CID 質(zhì)譜圖，(B) 在保留時間 4.06 分鐘處峰值的平均源內(nèi) CID 質(zhì)譜圖。
HPLC/UV法進行純度分析
通過比較相同濃度下碘己醇樣品與碘己醇認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的 HPLC 響應(yīng)，樣品與認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積比可快速進行濃度和純度分析。
計算碘己醇濃度比的公式如下:
碘己醇樣品和認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的 HPLC 圖譜如圖 3A 和 3B 所示。
碘己醇樣品的兩個峰面積之和的平均值為 714 (圖3A)，碘己醇認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)品的平均值為 740 (圖3B)。通過濃度配比計算，計算得到樣品中碘己醇的濃度為 0.0964mg/ml，純度為 96.4%，符合規(guī)定的產(chǎn)品純度 ≥95%。
圖3: (A) 碘己醇樣品 (0.1mg/ml) 的 HPLC 圖譜 (254nm); (B) 碘己醇標(biāo)準(zhǔn)品(0.1mg/ml) 的 HPLC 圖譜(254nm)。
為了更準(zhǔn)確地測定碘己醇樣品的純度，在 25-500μg/mL 的五種不同稀釋水平下，對每種濃度進行三次測試，建立了碘己醇認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的校準(zhǔn)曲線。得到的線性校準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為 0.9999 (圖4)，顯示出良好的線性。
圖4: 碘己醇 HPLC 色譜標(biāo)度曲線 (254nm)
采用碘己醇校準(zhǔn)曲線法，測定碘己醇樣品的純度為 97.5%，高于樣品規(guī)定的低純度95%，與通過比值計算得到的測量值僅相差 1.1%。因此對于認(rèn)證的參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，通過校準(zhǔn)曲線的方法或直接紫外響應(yīng)比分析的方法都可以用于具有紫外吸收的有機化學(xué)品的純度測定。
實驗結(jié)論
Advion Interchim Scientific® AVANT™ (U)HPLC系統(tǒng)能夠為造影劑碘己醇的純度分析提供準(zhǔn)確的測試方法。UHPLC-CMS 聯(lián)用，不僅可以確認(rèn)目標(biāo)化合物，還可以快速確定雜質(zhì)。
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