久久97精品国产96久久小草|秋霞电影网一区二区三区|成人欧美视频一区二区三区黑人|午夜av在线免费观看

當前位置:化工儀器網(wǎng)-質譜網(wǎng)首頁-技術文章列表-【Zeno SWATH DIA新技術】皮克級超低上樣量下的穩(wěn)定蛋白質組鑒定及定量

【Zeno SWATH DIA新技術】皮克級超低上樣量下的穩(wěn)定蛋白質組鑒定及定量

2022年07月18日 14:21 來源:SCIEX

 

圖片

ZenoTOF 7600系統(tǒng)配備的Zeno Trap(Zeno阱)功能激活后,可以使SWATH DIA工作流程中的肽段二級質譜靈敏度提高5-6倍左右,使得蛋白質組學工作流程平臺中使用納克甚至皮克級樣品量成為可能。我們應用Zeno SWATH IDA流程,對低進樣量K562樣品進行分析,使用納升液相系統(tǒng)進行蛋白質鑒定和定量測試,并且評價了DIA-NN中使用基于自建數(shù)據(jù)庫和非自建庫的分析流程。

液相方法:液相系統(tǒng):M Class系統(tǒng)(Waters),色譜柱:EV-1106 色譜柱,15 cm x 150 μm,1.9 μm 粒徑,流速:300 nL/min,梯度:45min。

 

圖片

 

質譜方法:質譜:ZenoTOF 7600系統(tǒng),采集模式:Zeno SWATH DIA,可變窗口數(shù):80個(m/z 400-903),一級累積時間:50毫秒,二級累積時間:18毫秒,源氣參數(shù):離子源電壓3200 V,溫度225°C,Gas1 :10 psi ,CUR gas :20 psi。

 

數(shù)據(jù)分析:Zeno SWATH DIA數(shù)據(jù)使用DIA- NN軟件處理,分別使用自建數(shù)據(jù)庫和非自建庫流程,自建數(shù)據(jù)庫為之前由OneOmics建立的人細胞裂解液數(shù)據(jù)庫。


主要結果:


1.

低進樣量時蛋白質鑒定和定量數(shù)量

在不同進樣量時測試蛋白質鑒定和定量數(shù)量,可以看到在250 pg進樣量時,K562樣品可以鑒定到880個蛋白質( FDR<1%),其中327個蛋白質CV低于20% ( 圖1)。隨著樣品進樣量的增加,蛋白質鑒定數(shù)量增加,進樣5ng時鑒定出3752個蛋白( FDR<1%),其中2457個蛋白CV低于20%??瞻讟悠钒凑障嗤瑮l件進行分析,未檢測到蛋白或多肽,說明工作流程可靠性。

圖片
圖片

圖1. 不同低進樣量樣品中蛋白質(左)

肽段(右)的鑒定和定量數(shù)量

 

左圖透明柱狀圖代表global FDR<1%時蛋白質鑒定數(shù)量,實心柱狀圖代表FDR <1%和CV <20%的可定量蛋白質數(shù)量。

 

2.

采用自建數(shù)據(jù)庫和非自建庫時蛋白質鑒定數(shù)量對比

使用DIA-NN分別進行基于自建數(shù)據(jù)庫的數(shù)據(jù)處理,以及直接從人類FASTA文件中生成理論數(shù)據(jù)庫的分析??傮w而言,兩種數(shù)據(jù)處理方法蛋白質鑒定的重疊程度很高,使用自建數(shù)據(jù)庫處理的蛋白質鑒定數(shù)量略多(約4%)(圖2),二者共同鑒定到的蛋白質為819個。

 

圖片

圖2. 使用數(shù)據(jù)庫與非數(shù)據(jù)庫分析流程中

蛋白質鑒定數(shù)的對比

 

3.

Zeno SWATH IDA流程穩(wěn)定性測試

通過比較間隔1個月進樣的2組實驗來評估低進樣量實驗的日間重復性,每次實驗對相同的K562原液進行稀釋,使用Zeno SWATH DIA進行分析??梢钥吹?,在3種低進樣量下,觀察到相近的蛋白質鑒定數(shù)量(圖3)。


圖片

圖3. 用獨立稀釋的K562樣品進行不同時間的比較


兩組實驗中,每個進樣量樣品均進行3次采樣。數(shù)據(jù)在DIA-NN軟件中使用基于自建數(shù)據(jù)庫的流程進行數(shù)據(jù)處理。透明柱狀圖表示global FDR <1%的蛋白質鑒定數(shù),實心柱狀圖帶表示FDR <1%和CV <20%的可定量蛋白質數(shù)。

 


 

圖片
圖片

掃碼注冊下載原文

 

 

 

圖片

聲明:版權為 SCIEX 所有。歡迎個人轉發(fā)分享。其他任何媒體、網(wǎng)站如需轉載或引用本網(wǎng)版權所有內容須獲得授權, 轉載時須注明「來源:SCIEX」。申請授權轉載請在該文章下“寫留言"。

 

 

免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其他方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
  • 本網(wǎng)轉載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。

久久97精品国产96久久小草|秋霞电影网一区二区三区|成人欧美视频一区二区三区黑人|午夜av在线免费观看

亚洲综合欧美日韩| 日本白嫩丰满人妻videos| 一区二区三区中文字幕在线观看| 亚洲av毛片在线观看| 成人性生交大片免费看直播| а√天堂资源中文在线官网九色| 亚洲一区二区三区成人网站| 国产精品无遮挡| 高潮毛片无遮挡免费| 久久久久久久久久综合| 特黄aaaaaaaaa毛片免 | 成人在线观看免费| 日本老熟妇mature高潮| 99热在线免费观看| 99久久精品久久亚洲精品| 人妻巨大乳一二三区| 日本女优三级| 中文字幕免费在线观看视频| 玩弄人妻少妇500| 欧美性猛交xxxx乱大交密桃| 久久久久高潮毛片免费全部播放| 国产三级电影在线看| 精品裸体舞一二三区| 护士小嫩嫩好紧好爽| 2019中文在线高清观看电视剧| 国产人妖 ts cd 一区91| 男人进女人下面视频| 国产成人精品一区二区三区免费| 久久精品99国产| xnxx丰满人妻| 狠狠爱五月婷婷| www.日本在线播放| 国产在视频线在精品视频55| japanese极品少妇白浆| 国产一精品一aⅴ一免费| 亚洲国产aⅴ成人精品无吗 | 国产精品成人久久久久| 日韩av免费在线观看| 五十六十老熟女毛片| 人人妻人人澡人人爽人人qvq| 97欧美精品人妻系列|